Práctica 10. Tinción de Ziehl-Neelsen

Práctica 10: Tinción de Ziehl-Neelsen

Objetivo
-El objetivo de esta práctica se basa en la tinción de Ziehl-Neelsen, para la posterior visualización de bacterias ácido-alcohol resistentes.

Fundamento
-La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir la decoloración con ácidos fuertes después de ser coloreadas con solución de fucsina caliente, permite reunirlas bajo la denominación general de bacterias “ácidoresistentes” o “ácido-alcohol resistentes”.
La ácido-alcohol resistencia es la capacidad de incorporar ciertos colorantes y retenerlos después de someterlos a la acción de ácidos y alcohol y está determinada por la presencia en la pared celular de los ácidos micólicos que son ácidos grasos de cadenas ramificadas de alto peso molecular (60 a 70 átomos de carbono)

Material
-Guantes
-Mechero Bunsen
-Fucsina
-Alcohol-Clorhídrico
-Azul de metileno
-Agua destilada
-Alcohol
-Portas
-Pipetas pasteur
-Torunda
-Microscopio óptico

Procedimiento
1.Preparar el banco de trabajo

2.Preparar una extensión fijada por calor ( en  nuestro caso, cuatro extensiones, con las bacterias 5, 11, AAr1, AAr2) siguiendo el procedimiento explicado en la práctica anterior.

3. Cubrir las extensiones con fucsina fenicada (si no se abre la pared bacteriana, la fucsina no penetra), colocando los portas en una rejilla.


4. Calentad los portas por debajo, con una torunda con alcohol hasta que emita vapores (5 minutos aproximadamente) y dejadlo enfriar. La torunda se prepara envuelta en algodón y una gasa, impregnada de alcohol, y prendida con un mechero.



5.Lavar los portas con cuidado de no eliminar la muestra fijada y escurridlos


6. Añadir alcohol.clorhídrico al 3-5% y dejarlo 2 minutos a temperatura ambiente


7.Lavar los portas con agua destilada y escurrir

8.Cubrir las preparaciones con azul de metileno durante dos minutos


9.Lavar con abundante agua destilada, escurrirlos y dejar secar a temperatura ambiente

10.Observar al microscopio

Resultados
-Tras la observación al microscopio óptico de las distintas preparaciones, los resultados obtenidos son los siguientes:
- AAr1 no es ácido-alcohol resistente
-AAr2 no es ácido-alcohol resistente
- La 11 es ácido-alcohol resistente

- La 5 no es ácido-alcohol resistente





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