Práctica 8. Siembra por agotamiento de asa

Práctica 8: Siembra por agotamiento de asa

Objetivo

-El objetivo de esta práctica es aislar bacterias en cultivos primarios. Para ellos vamos a utilizar una placa con medio de cultivo sólido.

Fundamento

-Se basa en descargar totalmente la carga realizada con el asa de siembra, a lo largo de toda la superficie del medio, de manera que la concentración de muestra en las distintas zonas de la placa va disminuyendo a medida que se va agotando el material cargado con el asa.

Material

-Guantes

-Asa de siembra de platino
-Asa de siembra desechable

-Placa con medio sólido

-Muestra (bacterias de nuestra boca)

-Mechero bunsen

-Gradilla

-Guantes

Procedimiento

1.Se prepara el banco de trabajo

2.Se enciende el mechero bunsen

3.Se esteriliza el asa de siembra y se coge una pequeña cantidad de muestra del tubo que contiene lo que nos interesa sembrar

4.Se realiza la siembra de la siguiente manera:

-Se coloca el asa sobre el medio de cultivo en un punto periférico de la placa y se desplaza suavemente por la superficie con un movimiento continuo y rápido en forma de Z, de pared a pared, avanzando hacia el centro de la placa, hasta cubrir un tercio de la superficie.

-Se gira la placa 90º en sentido contrario a las agujas del reloj y se repite el movimiento explicado anteriormente

-Se vuelve a girar 90º de la misma forma y se vuelve a repetir el movimiento

-Se gira por última vez (de la misma manera), y observamos un pasillo central sin sembrar. Éste último movimiento consiste en realizar un desplazamiento del asa en zig-zag por este pasillo central, desde la periferia hacia el centro, de manera que la primera línea arranca desde la zona sembrada a la izquierda del pasillo, pero el resto de líneas no tocan las zonas que ya han sido sembradas.

-Este pasillo sembrado en el último movimiento, es donde se espera que se produzca el crecimiento de colonias de bacterias aisladas. Indicará que la siembra se realizó correctamente.

-DATO: Este procedimiento de siembra por agotamiento de asa, lo hemos realizado con dos asas de siembra distintas, en dos días distintos;

1.Asa de siembra de platino; en este caso hay que esterilizar el asa entre fase y fase de descarga, y hay que tener en cuenta, que al realizar la siguiente fase hay que empezar desde la cola de la última línea de siembra de la fase anterior (porque al esterilizar nos hemos quedado sin carga en el asa, de este modo, al empezar cogemos un poco de carga de la fase que realizamos anteriormente).

2.Asa desechable; en este caso, no se esteriliza entre fase y fase, y lo que hay que tener en cuenta, es que de una fase a otra, tenemos que levantar el asa, para que la siguiente fase no sea continuación de ésta, sino fases de siembra independientes.

Conclusión

-Una vez que crezcan las colonias aisladas, prodemos utilizarlas como muestras para tinciones que explicaremos en las prácticas siguientes como son, la tinción de Gram, la de  Ziehl-Neelsen o la de Wirtz-Conklin