Práctica 9. Tinción de Gram

Práctica 9: Tinción de Gram

Objetivo

-La tinción de Gram permite diferenciar dos grupos de bacterias, las Gram+ y las Gram-, según se comporten ante esa tinción.

Fundamento

-Se basa en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared y se tiñen de color azul, mientras que las Gram- tienen una capa más fina y una capa de lipopolisacáridos externa y se tiñen de color rosa.

Materiales

-Papel de filtro

-Mechero Bunsen

-Portaobjetos

-Asa de siembra

-Suero fisiológico (SSF)

-Cristalizador

-Tinción Gram : Cristal Violeta, Lugol, Alcohol/ acetona, Safranina

-Agua destilada

Procedimiento

1.Preparamos el banco de trabajo

2.Realizar una extensión

3.Una vez tenemos la extensión preparada, se fija mediante calor con ayuda del Mechero Bunsen

4.Una vez fijada la extensión, colocar el porta con nuestra muestra  en un cristalizador. Cubrir nuestra muestra con el colorante Cristal Violeta, dejándolo actuar durante 1 minuto.

 5.Al cabo de este tiempo, lavar la preparación con agua de grifo, y escurrir. Cubrir con lugol durante 1 min y lavar nuevamente y escurrir.

6.Cubrir la preparación con una mezcla de alcohol/acetona en proporción 1:1 durante 30 segundos, y escurrirlas .Lavar con agua de grifo y escurrir bien.

7.Finalmente, cubrir con colorante Safranina durante 2 minutos, y volvemos a escurrir. 

8.Lavamos con abundante agua del grifo, y dejamos secar a Tª ambiente.

9.Una vez seca nuestra extensión teñida, podemos observarla al microscopio óptico.

Resultado