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Práctica 21. API

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Fundamento La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia  Enterobacteriaceae  y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 tests bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. Materiales Papel de filtro Guantes Suero fisiológico (SSF) Mechero Bunsen Asa de platino Muestra , con la colonia bacteriana en estudio Placa API Estufa Parafina Procedimiento Realizamos una dilución de la muestra ,  ponemos  en un tubo 2 ml de SSF y un par de colonias de la muestra en estudio depositamos 20 microlitros en cada uno de los pocillos de la placa API debemos añadir gotas de parafina a aquellos pocillos que están indicados son un subrayado. colocamos la placa
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Práctica 20. Distintos medios de cultivo

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AGAR MUELLER.HINTON -Medio recomendado para realizar pruebas de sensibilidad a los antibióticos -Se puede suplementar con sangre y obtener medios de Agar sangre para cultiuvo -Utilizado para aislamiento de microorganismo nutricionalmente exigentes AGAR MACKONKEY -Se utiliza para aislar enterobacterias -Contiene sales de hierro y cristal violeta que inhibe el crecimiento de Gram + -Además incluye un indicador de fermentación de lactosa paar diferenciar bacterias fermentadoras de no fermentadoras AGAR LEVINE O EMB ( eosina y azul de metileno) -Se usa para aislar enterobacterias -Contiene eosina y azul de metileno que inhibe el crecimiento de gram + y permite diferenciar bacterias fermentadoras de no fermentadoras de lactosa AGAR HIERRO DE KLIGLER -Es un medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias -Permite determinar ; -Si la baceteria metaboliza glucosa o lactolas -Si la bacteria produce gas -Si la bacterias produce ácido sulfhídrico -Co
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Práctica 19.IMVIC

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Fundamento Son cuatro pruebas bioquímicas.Se emplean fundamentalmente para la identificación de las  Enterobacterias  (bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador). Dependiendo de las condiciones, las enterobacterias, pueden realizar un metabolismo aerobio (si disponen de oxígeno), realizar una respiración anaerobia (si hay nitratos u otro aceptor de electrones) y distintas fermentaciones. -Indol -Rojo metilo -Voges-Proskauer -Citrato sódico Materiales -Reactivos -Bacterias -Medios de cultivo -Mechero bunsen -Pipetas pasteur INDOL Fundamento Se determina si la bacteria posee una enzima (triptofanasa). La triptofanasa hidroliza el triptófano  en  indol y alanina. El indol se detecta empleando un reactivo específico (Reactivo de Kovacs). El triptófano forma parte de las peptonas del medio. Procedimiento 1.Inocular una o dos colonias en caldo triptófano o peptona e incubar 24-48h 2.Añadir 5 gotas de reactivo de Kovac y efectuar
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Práctica 18. Siembra en KIA

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Fundamento Con este método se pueden realizar 3 pruebas al mismo tiempo: el consumo de azúcares (lactosa y glucosa), la producción de gas y la poducción de ácido sulfhídrico.  Cuando un microorganismo consume azúcares el producto metabólico son ácidos orgánicos, sin embargo, cuando no consume azúcares es porque consume proteínas y alcalizan el medio.  -El obejtivo es i dentificar enterobacterias por su capacidad de metabolizar la lactosa .  Materiales -Tubos de ensayo - Asa de siembra - Mechero Bunsen - Pipeta de 10 ml - Agar-Hierro-Kliger - Nuestras bacterias Procedimiento 1.Sembrar nuestras bacterias en un medio agar hierro kliger ( siembra en picadura combinada con siembra en superficie) en un tubo. 2.Incubar 24h a 35ºC  3.Efectuar la lectura: Resultado -Los resultados no son fiables ya que han pasado más de 48h -A pesar de no ser fiables, nuestros resultados son: -Fondo amarillo/pico rojo --> Fermenta glucosa -Fondo amrillo/pi
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Práctica 17. Coagulasa

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Fundamento La   coagulasa  es una proteína producida por varios microorganismos que permite la conversión del fibrinógeno  en fibrina . En el laboratorio, se usa para distinguir entre diferentes tipos de  Staphylococcus . Un resultado de coagulasa positivo indica que la muestra contiene  Staphylococcus aureus . Esta proteína también es producida por  Ysersinia pestis. Material -Papel de filtro. -Tubos de hemólisis. -Mechero Bunsen. -Mechero. -Pipeta Pasteur. -Asa de siembra -Plasma -Nuestras bacterias Procedimiento 1.Incorporar una muestra del cutivo a un tubo de hemólisis que contenga . ml de plasma y mezclar po rotación 2.Incubar durante 4h a 37º C(baño maría) y efectuar la lectura -Se observa coágulo, coagualasa positiva -No se observa coágulo, coagulasa negativa. En este caso se vuelve a incubar hasta las 24h, pero a 22-25ºC y se repite la lectura Resultado -Nuestra bacteria 5, ha formado coágulo en el plasma, coagulasa positiva -Nuestra bacteri
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Práctica 16. Oxidasa

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Fundamento - L a prueba de la oxidasa se utiliza como una característica  fenotípica   en la identificación de cepas  bacterias   pues determina si la bacteria produce citocromo oxidasa (y por lo tanto utiliza oxígeno en la cadena de transporte de electrones). Las bacterias que deben utilizar oxígeno se denominan  aerobias , y las que pueden utilizar oxígeno pero también otros compuestos se denominan  anaerobias   facultativas. La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para Identificar todas las especies de  Neisseria  (+) Diferenciar  Pseudomonas  de los miembros oxidasa negativo de las enterobacterias. Materiales -Contenedor -Tiras reactivas con fenilendiamina -Asa de siembra -Bacterias 5 y 11 -Mechero bunsen -Guantes y bata -Papel de filtro (dos) Procedimiento 1.Depositar una colonia de nuestras bacterias sobre la tira reactiva 2.Fotar la colonia sobre la zona reactiva con ayuda del asa de siembra 3.Esperar 10-30 segundos y realizar l
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Práctica 15. Catalasa

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Fundamento - La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa. Materiales -Tubo de ensayo -Agua oxigenada (peróxido de hidrógeno) -Asa de siembra -Bacterias 5 y 11 -Porta -Mechero bunsen Procedimiento 1.Añadir una gota de peróxido de hidrógeno ( solución al 3%) 2.Coger 3 colonias de nuestra bacteria y depositar en el porta, mezclándola con elmperóxido de hidrógeno, con ayuda del asa de simebra ( la colonia tiene que proceder de un cultivo joven y puro, de 24h) 3.Esperar 15-20 segundos y realizar la lectura: -Si se forman burbujas, catala positiva -Si no se forman burbujas, catalasa negativa DATO : Esta prueba se puede realizar tanto en porta como en tubo, los pasos serían los mismos. Resultado -Nuestra bacteria 5 ha formado b
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