Microbiología Clínica

Práctica 11: Tinción de Wirtz-Conklin Objetivo -El objetivo de esta práctica se basa en realizar la tinción de Wirtz-Conklin para visualizar endoesporas. Fundamento -Las esporas son formas de resistencia que se forman en el interior del citoplasma de algunas bacterias, fundamentalmente de Bacillus y Costridium. La pared de las esporas es bastante impermeable por lo que cuesta trabajo teñirlas (se refuerza la coloración gracias a un mordiente), pero una vez teñidas, tras la decoloración perderá el color toda la bacteria excepto las esporas. Material  -Guantes -Verde malaquita 5% -Torunda -Alcohol -Safranina al 0.5% -Mechero bunsen -Portas -Asa de siembra -Piseta Procedimiento 1.Preparar el banco de trabajo 2. Preparar cuatro extensiones ( bacteria 5 y 11, espora 1, espora 2) fijadas por calor. 3.Cubrir las preparaciones con verde malaquita al 5%, colocando los portas en una rejilla 4.Calentad los portas con una torunda con alcohol p

Práctica 10: Tinción de Ziehl-Neelsen Objetivo -El objetivo de esta práctica se basa en la tinción de Ziehl-Neelsen, para la posterior visualización de bacterias ácido-alcohol resistentes. Fundamento -La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir la decoloración con ácidos fuertes después de ser coloreadas con solución de fucsina caliente, permite reunirlas bajo la denominación general de bacterias “ácidoresistentes” o “ácido-alcohol resistentes”. La ácido-alcohol resistencia es la capacidad de incorporar ciertos colorantes y retenerlos después de someterlos a la acción de ácidos y alcohol y está determinada por la presencia en la pared celular de los ácidos micólicos que son ácidos grasos de cadenas ramificadas de alto peso molecular (60 a 70 átomos de carbono) Material -Guantes -Mechero Bunsen -Fucsina -Alcohol-Clorhídrico -Azul de metileno -Agua destilada -Alcohol -Portas -Pipetas pasteur -Torunda -Microscopio óptico Procedimie

Práctica 9: Tinción de Gram Objetivo -La tinción de Gram permite diferenciar dos grupos de bacterias, las Gram+ y las Gram-, según se comporten ante esa tinción. Fundamento -Se basa en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared y se tiñen de color azul, mientras que las Gram- tienen una capa más fina y una capa de lipopolisacáridos externa y se tiñen de color rosa. Materiales -Papel de filtro -Mechero Bunsen -Portaobjetos -Asa de siembra -Suero fisiológico (SSF) -Cristalizador -Tinción Gram : Cristal Violeta, Lugol, Alcohol/ acetona, Safranina -Agua destilada Procedimiento 1.Preparamos el banco de trabajo 2.Realizar una extensión 3. Una vez tenemos la extensión preparada, se fija mediante calor con ayuda del Mechero Bunsen 4.Una vez fijada la extensión, colocar el porta con nuestra muestra  en un cristalizador. Cubrir nuestra muestra con el co

Práctica 8: Siembra por agotamiento de asa Objetivo -El objetivo de esta práctica es aislar bacterias en cultivos primarios. Para ellos vamos a utilizar una placa con medio de cultivo sólido. Fundamento -Se basa en descargar totalmente la carga realizada con el asa de siembra, a lo largo de toda la superficie del medio, de manera que la concentración de muestra en las distintas zonas de la placa va disminuyendo a medida que se va agotando el material cargado con el asa. Material -Guantes -Asa d e siembra de platino -Asa de siembra desechable -Placa con medio sólido -Muestra (bacterias de nuestra boca) -Mechero bunsen -Gradilla -Guantes Procedimiento 1.Se prepara el banco de trabajo 2.Se enciende el mechero bunsen 3.Se esteriliza el asa de siembra y se coge una pequeña cantidad de muestra del tubo que contiene lo que nos interesa sembrar 4.Se realiza la siembra de la siguiente manera: -Se coloca el asa sobre el medio de c

Práctica 7 : Siembra en tubo inclinado Objetivo -El objetivo de esta práctica es realizar una siembra de microorganismos en un tubo con medio sólido inclinado. Fundamento -Se puede realizar tanto en placa como en tubo inclinado, en este caso vamos a explicar utilizando un tubo inclinado. Se basa en sembrar una cantidad determinada de producto, y repartir de manera uniforme sobre la superficie inclinada del medio. Materiales -Asa de siembra -Tubo inclinado con medio sólido -Muestra a sembrar -Mechero bunsen -Guantes -Gradilla Procedimiento 1.Se prepara el banco de trabajo 2.Se enciende el mechero para crear un ambiente estéril. Procedemos a abrir el tubo que contiene la muestra que se quiere sembrar, pasándolo por el mechero para esterilizar. 3.Se esteriliza el asa de siembra, y se recoge una pequeña cantiad de muestra. 4.Una vez cerrado y esterilizado el tubo que contenía la muestra (tubo en el cual depositamos el hisopo con un

Práctica 6: Tinción con azul de metileno Objetivo -Teñir con un colorante disuelto en solución acuosa o alcohólica, las bacterias presentes en una extensión, para que éstas se tiñan de manera homogénea. Fundamento -El azul de metileno tiñe todas las bacterias por igual, principalmente el citoplasma de éstas. No es un colorante diferencial, ya que cuando se tiñen microorganismos, los tiñe a todos por igual (todas las bacterias absorben este colorante).Es una tinción simple, rápida y sencilla. Material -Azul de metileno -Agua destilada -Pipetas pasteur -Mechero bunsen -Portas -Microscopio -Actimel Procedimiento 1. Preparar el banco de trabajo 2. Realizar una extensión, fijada con calor y utilizar como muestra una gota de actimel. 3. Una vez fijada la extensión, cubrirla con una solución al 1% de azul de metileno e incubarlo 2 minutos, a temperatura ambiente. Para la incubación utilizaremos un cristalizador como soporte. 4. Lavar